HPLC - Reversed Phase och Normal Phase

Separationsmekanismerna i HPLC (High Performance Liquid Cromathography, även kallat High Pressure Liquid Cromathography) baseras på polaritet, elektrisk laddning och molekylstorlek.

   I Normal Phase-HPLC och Reversed Phase-HPLC baseras separationen på polaritet. Man utnyttjar regeln ”Lika löser lika” i de två separationsmetoderna.

N-HPLC

I N-HPLC har man en väldigt polär stationärfas (inne i en kolonn) och en mer opolär mobilfas. De polära provkomponenterna kommer att attraheras till den polära stationärfasen vilket gör att de bromsas in. De opolära komponenterna i provet kommer att attraheras till den opolära mobilfasen och kommer på så vis att röra sig snabbare genom kolonnen. På så vis sker separation baserat på komponenternas polaritet. Den mobila fasen utgörs helt av organiska lösningsmedel (alltså inget vatten).

R-HPLC

I R-HPLC är förhållandena omvända (därav namnet ”reversed”) jämfört med N-HPLC. Stationärfasen är opolär och mobilfasen är polär. Provkomponenterna som är opolära kommer att attraheras till den opolära stationärfasen och saktas därigenom ned. De polära provkomponenterna i provet kommer att attraheras till den polära mobilfasen och rör sig därför snabbare genom kolonnen.

Publicerat: 2015-07-19

Alexander diamant

alexander.diamant@gmail.com